Для исследования особенностей репродукции хромосом в том или ином типе клеток человека необходимо иметь точные сведения о длительности периодов клеточного цикла. Эти данные в настоящее время получены для ряда культур клеток человека и приведены в табл. 6.

Наибольшее количество исследований проведено с культурой лейкоцитов и наиболее полная информация получена относительно особенностей репродукции хромосом в конце периода синтеза. Анализ репликации ДНК в этот период поддается наиболее точному учету благодаря методической простоте эксперимента: тимидин-Н3 вносится в культуру лейкоцитов за 3—4 часа до фиксации, необходимые для того, чтобы клетки, находившиеся в конце периода S, прошли постсинтетический период (G2) и вошли в митоз. Таким образом, при данных условиях опыта метка обнаруживается лишь на тех участках метафазных хромосом, которые в самом конце периода синтеза находились в состоянии репродукции и включили тимидин-Н3. Отсутствие метки над хромосомами означает, что эти участки хромосом закончили репродукцию до того, как в среду был введен тимидин -Н3.
 

Если фиксировать клетки через 6, 8, 10, 12 и т. д. часов после введения в культуру тимидина-Н3, в метафазе мечеными будут обнаруживаться участки хромосом, находившиеся не только в самом конце периода синтеза, но также за 3, 5, 7 и 9 часов до его окончания соответственно (при длительности периода G2 3 часа). Немечеными будут оставаться лишь участки, редуплицировавшиеся в самом начале периода синтеза. Таким образом, используя метод темпоральной фиксации после введения в культуру тимидина-Н3 и продвигаясь от конца периода синтеза к его началу, можно составить картину последовательности репродукции отдельных хромосом и участков по длине хромосомы. Этот метод использован рядом исследователей (German, 1961, 1962, 1964; German и др., 1964; Lima-de-Faria и др., 1961; Gilbert и др., 1962).
 

Второй метод состоит в импульсном (10—15 минут) введении тимидина-Н3 в растущую культуру с последующим его отмыванием и продолжением культивирования клеток в немеченой среде. Темпоральная фиксация через 4, 6, 8, 10 и т. д. часов после импульсного введения в культуру тимидина-Н3 дает возможность выявить те участки хромосом, которые репродуцировались именно в те 10—15 минут, когда тимидин-Н3 находился в питательной среде. Этот метод также с успехом использован в исследованиях репродукции хромосом человека.

Исследование особенностей репликации хромосом в культуре клеток человека с помощью одного из описанных методов или при комплексном их использований позволило установить закономерности редупликации хромосом человека в ряде культур клеток, а также in vivo.
 

close